细胞，即为 50%红细胞悬液。
3、取试管 6 支，按下表先加入同血型正常人新鲜血清 0.5ml，其中 3、6 两支试管在 56℃水浴 30min，使补体灭活，其余 4 管置于室温 30min。此后按下表顺序操作。
 

加入物(ml)	待测管			对照管
试管号	1	2	3	4	5	6
正常人新鲜血清	0.5	0.5	—	0.5	0.5	—
正常人 56℃灭活血清	—	—	0.5	—	—	0.5
Acidic Buffer	—	0.05	0.05	—	0.05	0.05
50%患者红细胞悬液	0.05	0.05	0.05	—	—	—
50%正常人红细胞悬液	—	—	—	0.05	0.05	0.05
混匀，置于 37℃水浴中 1h(30min 时轻轻混匀一次)，离心。
阳性结果(溶血)	±	3+	—	—	—	—

 

结果判断：

正常人	不溶血
PNH 患者第 1 管(未酸化的血清)	不溶血或极其轻微溶血
PNH 患者第 2 管(酸化的血清)	部分溶血
PNH 患者第 3 管(加正常人灭活血清管)	不溶血

注意：如果 PNH 患者第 3 管(加正常人灭活血清管)溶血，则说明此溶血不依赖于补体，故不是 PNH，可能是红细胞有其他缺陷(如球形红细胞增多症)，应做进一步鉴别。
参考区间：正常人无溶血。注意事项：
1、  所用器具必须洁净干燥，以免溶血造成假阴性。
2、 血清酸化后应注意密闭保存，尽快检测，避免 CO₂ 逸出导致血清酸度降低，影响溶血程度。
3、 如果患者多次输血，其血液中的不正常细胞会相应减少，可呈弱阳性或阴性。出现这种情况应延长孵育时间至 4～6h，再观察溶血情况。
4、  该实验可作为 PNH 的过筛实验，阴性可排除 PNH，阳性应做酸化溶血实验证实。

有效期：6 个月有效。