满满干货—质粒保存及操作方法

一、质粒干粉（负20度保存，保质期90天，常温运输）

1、收到干粉质粒后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒；

2、将相应的感受态于冰盒上解冻，取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴 30min；

3、42度热激60s，冰浴2min，加入900μl无抗LB培养基，180rpm震荡培养45min；

4、6000rpm离心3min，留100μl上清重悬，再涂至对应抗性的LB平板上；

5、倒置培养过夜后，如菌落过多则稀释质粒转化，如没有菌落则取10ul质粒转化；

6、挑单菌落至对应抗性的LB液体培养基中过夜震荡培养，根据需要提取质粒。

一、液体质粒（负20度保存，保质期90天，冰袋运输）

1、收到液体质粒后请甩动保存管，让液体质粒不要吸附在管壁上；

2、根据实验需求取适量质粒，其余保存于负20度冰箱。

二、甘油菌种（负80度保存，保质期90天，冰袋运输）

1、收到甘油菌种后请甩动保存管，让菌液不要吸附在管壁上；

2、用接种环在固体平板上四区划线，如有抗性就加对应抗性；

3、恒温培养箱倒置培养12~16h；

4、务必挑取单菌落接种于液体培养基中，如有抗性就加对应抗性；

5、摇床震荡培养过夜，根据实验需要培养菌种。

 三、平板菌种（4度保存，保质期7天，冰袋运输）

直接挑取单菌落至液体培养基中，根据实验需要培养菌种。