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同型半胱氨酸(HCY)检测试剂盒说明书

人阅读 发布时间:2023-11-06 09:07

同型半胱氨酸(HCY)检测试剂盒说明书
(货号:E031-1-1 循环酶法
 

一、试剂用

本试剂盒用于定量测定血清中同型半胱氨酸含量。二、测定原理
氧化型同型半胱氨酸经三乙羧乙基膦(TCEP)还原形成游离HCY,游离型HCY 与底物反应,循环放大,同时产生腺苷。腺苷立即水解成氨和次内嘌呤,氨在谷氨酸脱氢酶的作用下,使 NADH 转换成 NAD+,通过检测反应中NADH 转换的吸光率降低速率,计算 HCY 的含量。

三、试剂组

  规 格 组 份 浓度

试剂一
(R1)

37mL×2
S-腺苷甲硫氨酸 0.1mmol/L
NADH 0.3mmol/L
三(2-羧乙基)磷氯化氢 0.5mmol/L
α-酮戊二酸 5.2mmol/L


试剂二
(R2)



10mL×2
HCY 甲基转移酶 6.0kU/L
谷氨酸脱氢酶 12.0kU/L
S-腺苷同型半胱氨酸水解酶 3.8kU/L
腺苷脱氨酶 5.6kU/L
甘露醇 0.2%
叠氮化na 0.3‰
标准品一 1mL×1 同型半胱氨酸 0μmol/L
校准品二 1mL×1 同型半胱氨酸 28.0μmol/L
注:不同批号的试剂不能混用。四、储存条件及有效期
原包装试剂在 2-8°C 避光储存,12 个月内有效。五、适用仪器
日立 7080 全自动生化分析仪
奥林巴斯AU400 全自动生化分析仪雅培C8000 全自动生化分析仪
东芝-40 全自动生化分析仪六、操作步骤
样品要求:最适样本为当日空腹采集的无溶血,无乳糜的血清。分光光度计法
  测定管 空白管 标准管
样本 μL 39    
标准品一μL   39  
标准品二μL     39
试剂一 μL 720 720 720
混匀,37°C 孵育 5min
试剂二μL 195 195 195
混匀,37°C 下孵育 2 分钟后,340nm0.5cm 光径,蒸馏水调零,测定吸光率 A 初始37°C 孵育 2 分钟后测定
吸光率 A 终止,计算ΔA/min=A 初始-A 终止/2
生化仪上机参数:

七、产品指

1. 空白吸光度A340≥1.000
  1. 空白吸光度变化率ΔA/min≤0.0300
  2. 线性范围 0-50μmol/L,相关系数 r2≥0.9900,线性偏差在
-20%-20%范围内;
4. 重复性CV≤8.0%
5. 批间差 ≤10.0%
6. 相当偏差(B)在-15%-15%范围内。八、产品指标
1、 本产品仅用于科研,切勿服用;
2、 请勿将试剂一和二混合使用,不同批号的试剂建议在测定前重新定标;
3、 试剂开启后应根据用量倒入洁净的瓶内测定,剩余试剂应密闭保存在冰箱中;
4、 样品含量超出线性范围时,将样品用生理盐水稀释测定,结果再乘以稀释倍数;
5、 试剂二含有叠氮化na,使用时戴橡胶手套;误入眼、口中或沾染到皮肤上请立即用清水彻底冲洗,必要时到医院就诊。其他废物按照相关法规处理。
 
温 度 37℃ 速率法
反应方向 向下 血清+R1 反应时间 300 
(或生化仪固定设置
定标方式 Linear 血清+R1+R2 延迟时间 120
样本量 13μL 主波长 340nm
试剂一 240μL 副波长 405nm
试剂二 65μL 检测时间 120
 
计算公式:
HCY含量
= DA测定/min - DA空白/min ´ C
 
μmol/L
DA标准
/min - DA

空白/min

ΔA/min:每分钟吸光度变化率;
C 标准:标准品二中 HCY 浓度,28μmol/L
 
 
 

 

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