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同型半胱氨酸(HCY)检测试剂盒说明书
人阅读 发布时间:2023-11-06 09:07
同型半胱氨酸(HCY)检测试剂盒说明书
(货号:E031-1-1 循环酶法)
(货号:E031-1-1 循环酶法)
一、试剂用途
本试剂盒用于定量测定血清中同型半胱氨酸含量。二、测定原理氧化型同型半胱氨酸经三乙羧乙基膦(TCEP)还原形成游离型 HCY,游离型HCY 与底物反应,循环放大,同时产生腺苷。腺苷立即水解成氨和次内嘌呤,氨在谷氨酸脱氢酶的作用下,使 NADH 转换成 NAD+,通过检测反应中NADH 转换的吸光率降低速率,计算 HCY 的含量。
三、试剂组成
规 格 | 组 份 | 浓度 | |
试剂一 (R1) |
37mL×2 |
S-腺苷甲硫氨酸 | 0.1mmol/L |
NADH | 0.3mmol/L | ||
三(2-羧乙基)磷氯化氢 | 0.5mmol/L | ||
α-酮戊二酸 | 5.2mmol/L | ||
试剂二 (R2) |
10mL×2 |
HCY 甲基转移酶 | 6.0kU/L |
谷氨酸脱氢酶 | 12.0kU/L | ||
S-腺苷同型半胱氨酸水解酶 | 3.8kU/L | ||
腺苷脱氨酶 | 5.6kU/L | ||
甘露醇 | 0.2% | ||
叠氮化na | 0.3‰ | ||
标准品一 | 1mL×1 | 同型半胱氨酸 | 0μmol/L |
校准品二 | 1mL×1 | 同型半胱氨酸 | 28.0μmol/L |
原包装试剂在 2-8°C 避光储存,12 个月内有效。五、适用仪器
日立 7080 全自动生化分析仪
奥林巴斯AU400 全自动生化分析仪雅培C8000 全自动生化分析仪
东芝-40 全自动生化分析仪六、操作步骤
样品要求:最适样本为当日空腹采集的无溶血,无乳糜的血清。分光光度计法
测定管 | 空白管 | 标准管 | |
样本 (μL) | 39 | ||
标准品一(μL) | 39 | ||
标准品二(μL) | 39 | ||
试剂一 (μL) | 720 | 720 | 720 |
混匀,37°C 孵育 5min | |||
试剂二(μL) | 195 | 195 | 195 |
混匀,37°C 下孵育 2 分钟后,340nm,0.5cm 光径,蒸馏水调零,测定吸光率 A 初始,37°C 孵育 2 分钟后测定 吸光率 A 终止,计算ΔA/min=(A 初始-A 终止)/2。 |
七、产品指标
1. 空白吸光度A340≥1.000;- 空白吸光度变化率ΔA/min≤0.0300;
- 线性范围 0-50μmol/L,相关系数 r2≥0.9900,线性偏差在
4. 重复性(CV)≤8.0%;
5. 批间差 ≤10.0%;
6. 相当偏差(B)在-15%-15%范围内。八、产品指标
1、 本产品仅用于科研,切勿服用;
2、 请勿将试剂一和二混合使用,不同批号的试剂建议在测定前重新定标;
3、 试剂开启后应根据用量倒入洁净的瓶内测定,剩余试剂应密闭保存在冰箱中;
4、 样品含量超出线性范围时,将样品用生理盐水稀释测定,结果再乘以稀释倍数;
5、 试剂二含有叠氮化na,使用时戴橡胶手套;误入眼、口中或沾染到皮肤上请立即用清水彻底冲洗,必要时到医院就诊。其他废物按照相关法规处理。
温 度 | 37℃ | 方 法 | 速率法 |
反应方向 | 向下 | 血清+R1 反应时间 | 300 秒 (或生化仪固定设置) |
定标方式 | Linear | 血清+R1+R2 延迟时间 | 120 秒 |
样本量 | 13μL | 主波长 | 340nm |
试剂一 | 240μL | 副波长 | 405nm |
试剂二 | 65μL | 检测时间 | 120 秒 |
计算公式:
HCY含量
= DA测定/min - DA空白/min ´ C
HCY含量
= DA测定/min - DA空白/min ´ C
(μmol/L)
DA标准
/min - DA
标准
空白/min
DA标准
/min - DA
标准
空白/min
ΔA/min:每分钟吸光度变化率;
C 标准:标准品二中 HCY 浓度,28μmol/L。