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鱼3甲基组氨酸(3-MH)试剂盒说明书

发布时间:2019-05-16 09:17 |  点击次数:

3甲基组氨酸(3-MH)试剂盒说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围:                                                          96T
5ng/L-180ng/L

使用目的:
本试剂盒用于测定鱼血清,血浆及相关液体样本3-甲基组氨酸(3-MH)含量
3甲基组氨酸(3-MH)试剂盒说明书实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本3-甲基组氨酸(3-MH)水平。用纯化的3-甲基组氨酸(3-MH)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入3-甲基组氨酸(3-MH)再与HRP标记的3-甲基组氨酸(3-MH)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后底物TMB显色。TMBHRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的3-甲基组氨酸(3-MH)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中鱼3-甲基组氨酸(3-MH)浓度。
试剂盒组成

1 30倍浓缩洗涤液 20ml×1 7 终止液 6ml×1
2 酶标试剂 6ml×1 8 标准品(320ng/L 0.5ml×1
3 标包被 12孔×8 9 标准品稀释液 1.5ml×1
4 样品稀释液 6ml×1 10 说明书 1
5 显色剂A 6ml×1 11 封板膜 2张  
6 显色剂B 6ml×1/ 12 密封袋 1
标本要求 
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但避免反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
  1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
160ng/L 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
80ng/L 4号标准品 150μl5号标准品加入150μl标准品稀释液
40ng/L 3号标准品 150μl4号标准品加入150μl标准品稀释液
20ng/L 2号标准品 150μl3号标准品加入150μl标准品稀释液
10ng/L 1号标准品 150μl2号标准品加入150μl标准品稀释液

  1. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀
  2. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟   
  3. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
  4. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
  5. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外
  6. 温育:操作同3
  7. 洗涤:操作同5
  8. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.
  9. 终止:每孔加终止50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)
  10. 测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值) 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
操作程序总结:

计算
  以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
3甲基组氨酸(3-MH)试剂盒说明书注意事项
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
  1. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
  2. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.本试剂不同批号组分不得混用。
保存条件及有效期
1试剂盒保存:2-8
2.有效期:6个月

3甲基组氨酸(3-MH)试剂盒说明书