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病毒DNA/RNA核酸提取试剂盒

发布时间:2019-03-29 17:50 |  点击次数:

 病毒DNA/RNA核酸提取试剂盒
【产品名称】病毒DNA/RNA核酸提取试剂盒
【包装规格】50T/盒
【预期用途】
本产品适合于从血清、血浆、牛奶、体液、培养液、组织匀浆液、拭子等样品中提取病毒RNA或DNA。试剂盒基于硅胶柱纯化技术,提取过程中无需使用有毒的酚氯抽提,也无需进行耗时的醇类沉淀。获得的DNA/RNA可直接用于RT-PCRPCRNorthern杂交、以及各种病毒检测等。

【主要组成成份】

组成 50T/
纯化柱 50
2ml 收集管 50
蛋白酶KB盒) 1.2ml
裂解液(Buffer AL 20 ml
洗涤液(Buffer RW 100 ml
Nuclease Free Water 10 ml
【储存条件及有效期】 
本产品部分组份(不含蛋白酶K保存室温(15-25),有效期12个月长期保存时需置于2-8蛋白酶K保存于-20,有效期12个月。
【注意事项】
  1. 自备无水乙醇(96-100%)、自备离心管;
  2. 为避免其他核酸的污染,必须使用不含DNARNA的离心管、吸管、枪头、试剂和手套,操作人员须戴口罩;
  3. 避免反复冻融蛋白酶 K会影响其活性。


【操作步骤】 
  1. 转移20 µl 蛋白酶K1.5ml离心管中。
  2. 转移200 µl样品,如血清、血浆、尿液、培养液上清、或其它无细胞体液至装有蛋白酶K的离心管中,震荡混匀5s。若样品不足200µl,用Buffer PBS或无核酶水补足。(咽/口腔拭子,或固体组织样品先用Buffer PBS浸泡或匀浆后,离心取上清进行操作。)
  3. 加入200µl 裂解液 至步骤2的混合液中,涡旋混匀15s,室温静置10min
  4. 加入250µl无水乙醇 至步骤3的混合液中,涡旋混匀15s,室温静置3min
  5. 纯化柱 装在2ml收集管中,转移步骤4的混合液至纯化柱中。12,000rpm离心1min。
  6. 倒弃滤液把纯化柱装回收集管中,加入650 µl 洗涤液 至纯化柱中,12,000rpm离心1min。
  7. 按照步骤6重复一次。
  8. 倒弃滤液把纯化柱套回收集管,12,000rpm离心空柱2min甩干纯化柱。
  9. 将纯化柱转移至新的1.5ml离心管,加入50µl Nuclease Free Water至纯化柱的膜中央,室温静置1min12,000rpm离心1min。离心管中即为所提取的样品DNA/RNA
常见问题
  1. 纯化柱堵塞
  1. 样品用量太多:处理动物抗凝血液时,样品量控制在100-150µl。尽量使用无细胞的样品,如血浆、血清、组织匀浆液的上清等。
  2. 蛋白酶 K活性下降:重新制备蛋白酶 K。使用后蛋白酶 K必须保存于-20℃,避免反复冻融。蛋白酶 K与裂解液不能预先混合。
  3. 样品含固体颗粒:在第4步加入乙醇前,12,000rpm离心3min去除未消化的杂质,转移上清液至新的离心管后再加入乙醇。
  4. 样品裂解不充分:样品与裂解液混匀不充分。重新提取,加入裂解液后先颠倒混匀3-5次,然后以最高速度涡旋让样品与裂解液充分混匀。
  1. 下游应用结果不理想
  1. 样品被反复解冻: 避免反复冻溶样品。推荐使用新鲜样品或只解冻过一次的样品。
  2. 蛋白酶K活性下降:更换蛋白酶K。使用后蛋白酶 K必须立即保存于-20℃,避免反复冻融。
  3. Nuclease Free Water被污染:更换新的Nuclease Free Water或DEPC处理水。
  4. 乙醇残留:柱子在洗脱前,需要空甩去除乙醇。对于敏感的应用,柱子在洗脱后,打开柱子的盖子,放置10-15min让乙醇彻底挥发。
  5. 洗脱效率:处理富含DNA的样品时,把Nuclease Free Water预热至55℃后再进行洗脱,有利于提高DNA得率。